КЛИМ-Тест

 

 

Наборы КЛИМ-Тест 3-х цветные моноклональные антитела

 

Наборы КЛИМ-Тест 2-х цветные моноклональные антитела

 

Наборы КЛИМ-Тест Дополнительные реагенты

 

     Набор реагентов «КЛИМ-Тест» для оценки клеточного иммунитета методом проточной цитометрии предназначен для профессионального использования в области аллергологии и иммунологии для in vitro диагностики и позволяет определять относительное содержание клеток, определяющих основные параметры клеточного иммунитета человека в цельной крови человека:

Зрелые Т-клетки

Т-хелперы

Т-супрессоры/цитотоксические

В-клетки

NK-клетки

     Полученные показатели используют для оценки состояния иммунной системы человека совместно с другими стандартными диагностическими алгоритмами.

ПРИНЦИП МЕТОДА

     Метод оценки основан на специфическом взаимодействии антиген- антитело с последующей идентификацией данной реакции на проточном цитометре посредством детекции молекул флюорохромов, конъюгированных с антителами.

     При проведении окрашивания в образцы цельной крови человека вносят антитела, меченые флуорохромами, которые специфически связываются с поверхностными антигенами лимфоцитов. В процессе анализа образцов на проточном цитофлюориметре, поток обтекающей жидкости с клетками пересекает лазерный луч, что вызывает его рассеивание, а флюорохромы, связавшиеся с клетками, флюреисцеируют. Флуоресцентные сигналы и сигналы рассеяния детектируются и регистрируются прибором, что позволяет получить информацию о размере клетки, ее внутренней структурированности и интенсивности флуоресценции.

СОСТАВ НАБОРА

     В состав набора входят основные реагенты, позволяющие провести оценку основных параметров клеточного иммунитета:

 

Каталог продукции КЛИМ-Тест

 

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

     Антитела поставляются в 0,5 мл забуференного раствора хлорида Na, содержащего бычий сывороточный альбумин и 0,1% (вес/объем) азида Na. В качестве флюорохромов использованы FITC, PE и, в случае 3-х цветных антител- PE-Cy5.

     В состав реагента входят комбинации антител к антигенам лейкоцитов человека:

     Антитела к CD3 связываются с CD3 антигеном, который экспрессируется на человеческих Т-лимфоцитах. Молекулярные массы: 20, 25, 28 kDa. Эти антитела реагируют с 85-90% Т-лимфоцитов периферической крови человека. Не взаимодействует с В-клетками и моноцитами, гранулоцитами и тромбоцитами. Используют для мониторинга относительного содержания Т-клеток в периферической крови человека.

     Антитела к CD4 связываются с CD4 антигеном, который экспрессирован на человеческих Т-лимфоцитах, имеющих хелперные/ индукторные функции. Молекулярная масса: 54 kDa. Данные антитела реагируют с 50-60% Т-лимфоцитов периферической крови человека. Не взаимодействуют с В-клетками, гранулоцитами и тромбоцитами. Используют для мониторинга относительного содержания Т-хелперов в периферической крови человека.

     Антитела к CD8 применяется для идентификации цитотоксических/супрессорных Т-клеток и субпопуляции NK-клеток. Молекулярная масса антигена: 30 kDa. Антитела реагируют с 20-30% Т-клеток периферической крови человека. Не взаимодействуют с В-клетками, моноцитами, гранулоцитами и тромбоцитами. Применяют для мониторинга субпопуляции цитотоксических/супрессорных Т-клеток в периферической крови человека.

     Антитела к CD19 антигену, который экспрессирован на человеческих В-клетках и их предшественниках. Не взаимодействует с другими гемопоэтическими клетками. Молекулярная масса 95 kDa. Используют для определения доли В-клеток в периферической крови человека.

     Антитела к CD16 взаимодействуют с Fc гамма рецептором III антигена CD16, который экспрессирован на нейтрофилах, на моноцитах (слабо), макрофагах (слабо) и NK-клетках. Молекулярная масса: 45-72 kDa. Используют для оценки NK-клеток в периферической крови человека.

     Антитела к CD14 связываются с CD14 антигеном, экспрессированным на моноцитарных клетках человека, макрофагах и гранулоцитах. Молекулярная масса: 45 kDa. В комбинации с CD45 применяют для подтверждения лимфоцитарного гейта при исследовании основных параметров клеточного иммунитета.

     Антитела к CD45 распознают Общий Лейкоцитарный антиген человека с молекулярной массой 200. Позволяет идентифицировать лейкоциты. В комбинации с CD14 применяют для подтверждения лимфоцитарного гейта при исследовании основных параметров клеточного иммунитета. Взаимодействуют только с гемопоэтическими клетками.

     Изотипический контроль для 2-х цветных моноклональных антител предназначен для идентификации границ неспецифического связывания рецепторов клеток образца со специфическими антителами.

     2-х и 3-х цветные калибровочные частицы (Бланк, FITC, PE, PE-Cy5) представляют собой 3-3,4 µm полистиреновые сферы с различными флюорохромами: FITC, PE, PE-Cy5. Эмиссия: FITC- 525 нм, PE- 575 нм, Pe-Cy5- 670 нм. Предназначены для для настройки установок проточного цитофлюориметра, установки компенсации флюоресценции и проверки чувствительности прибора. Длина волны лазера – 488 нм.

     Обтекающая жидкость является изотоническим раствором, предназначенным для подачи суспензии клеток в кювету проточного цитофлюориметра. В качестве антибактериального агента содержит 0,1 % (вес/объем) азида натрия.

     Раствор для лизирования эритроцитов предназначен для лизирования эритроцитов в образцах цельной крови человека. Содержит 2% формальдегида в качестве фиксирующего компонента.

РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

с 3-х цветными моноклональными антителами:

     Для проведения корректного исследования параметров клеточного иммунитета методом проточной цитометрии с 3-х цветными моноклональными антителами необходимо выделить популяцию лимфоцитов посредством исследования флюоресценцию CD45PE-Cy5 против бокового светорассеяния (SSC). Искомые лимфоциты представлены компактным, ярким кластером с низким SSC (График 1). Примените сохраненный гейт для получения результатов по параметрам: CD3/CD19, CD3/CD4, CD3/CD8, CD3/CD16 (График 2).

с 2-х цветными моноклональными антителами:

     Для проведения корректного исследования параметров клеточного иммунитета методом проточной цитометрии с 2-х цветными моноклональными антителами необходимо определить на графике область, соответствующую положению лимфоидных клеток. Для этого применяют антитела CD45FITC/CD14PE. Лимфоидные клетки находятся в зоне с низким боковым светорассеянием (SSC) и негативной флюоресценцией по CD14 (График 3). Исследуя флюоресценцию CD45 против прямого светорассеяния (FSC) также определяем область нахождения лимфоцитов (График 4). Применяя полученные координаты определяем корректный лимфоцитарный гейт (График 5).

Затем регистрируются результаты образца с Изотипическим контролем, которые позволяют выделить границу неспецифического связывания лимфоцитов клетками (График 6). Затем применить сохраненный гейт и границу неспецифического связывания для получения результатов по параметрам: CD3/CD4, CD3/CD8, CD3/CD19, CD3/CD16 (График 2).

УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ РЕАКЦИИ

Результаты исследования основных параметров клеточного иммунитета человека определяются в квадрантах графиков, получаемых на проточном цитофлюориметре. Искомые параметры, реагенты и квадранты указаны в Таблице 1:

     Результаты анализа выражаются в процентном отношении. Абсолютные показатели могут быть рассчитаны в соответствии с данными, полученными на гематологическом анализаторе.

     Полученные результаты сравниваются с референсными значениями по каждому параметру, что позволяет отнести их к норме или отклонению от нормы.

 

Наборы КЛИМ-Тест 3-х цветные моноклональные антитела

 

Наборы КЛИМ-Тест 2-х цветные моноклональные антитела

 

Наборы КЛИМ-Тест Дополнительные реагенты